通过快速和可扩展的直接唾液测试控制Covid-19的传播

你以前听过了这一切：测试设施前面的长线，训练有素的技术人员在全个人防护设备（PPE），以及一个臭名昭着的不舒服的鼻牌测试。这种情景结合了供应链问题，高测试成本和漫长的等待结果 - 使当前的测试程序不充分用于维修这种巨大的大流行性。鼻咽拭子一直是在这种大流行期间进行测试的金标准。尽管如此，它们仍然具有挑战性，因为拭子套件短缺，长工作流程和测试不舒服的性质，使用常规和常规筛选。更重要的是，由于测试不提供同一天的结果，假设或无症状患者可能在他们等待获得结果的同时在2-5天内感染许多其他患者。仅在美国拥有超过2000万个Covid-19案例，寻找一个敏感，快速，轻松，廉价的测试工作流程是控制病毒传播的关键。随着我们走向重新开放的学校，学院和工作场所，对这种快速和可扩展的测试的需求将会显着增加。

是什么让理想的测试工作流程？

为了提供更好的传染病管理和改进临床决策，在资源限制的护理点设置中建立了保证诊断测试标准。测试应经济实惠，敏感，特定，用户友好，快速（且鲁棒），无设备，并可交付给最终用户（Blacksell 2012）。任何传染病的理想测试方法都应该需要最小的资源转移（包括临床诊断检测设施的人员和昂贵的试剂），价格实惠和可扩展，并且可以快速可靠地鉴定无症状或亚临床感染的病毒存在（OTT ETal。2020）。目前的测试方法未能满足这些标准中的许多或者可以显着提高。简化样本收集和测试工作流程的努力将加速结果的时间。

Covid-19测试最好的样本是什么？

标准Covid-19诊断测试使用从鼻咽拭子样品分离的病毒RNA上的RT-QPCR检测SARS-COV-2。然而，样本收集和测试程序遭受了几种缺点：暴露于医疗保健工作者的风险，测试和安全供应的全球短缺，以及长期周转时间，可以限制扩展测试的能力（图1）。验证绕过这些问题的新诊断方法对于扩展测试努力至关重要。唾液测试提供了鼻咽拭子测试的几个有希望的优势。唾液测试与SARS-COV-2检测的敏感性敏感性和更有利于广泛采用的敏感性（Wyllie等，2020）：样品收集是非侵入性的，可以在家里可靠地完成，而不会暴露培训的卫生专业人士，并确实如此不依赖于拭子和专用收集管的有限供应。唾液检测在疾病的传染阶段最有效，在症状开始前1-3天，大约7天跨越。相比之下，患者在患者发育症状后，鼻拭子测试最可靠（Wyllie等人2020; OTT等人。2020）。

图1. SARS-COV-2的鼻拭子测试冗长，遭受了防止扩展努力的供应链问题。

如何改进和扩大测试?

为了超越大流行和开放的经济，需要使用廉价，快速，无创的​​测试需要大规模扩展，不需要专门的拭子和管。这种诊断测试将允许每周测试几次，直到我们可以在规模施用可靠的疫苗。最近，开发了几种方案，使得唾液测试无出，明显更快。将样品收集在任何无菌管中，用试剂处理以分离病毒RNA，并直接处理RT-QPCR，而无需冗长的RNA提取步骤。这种快速简单的协议，结合不需要专门设备的非侵入性样品收集，是显着加速测试努力。实际上，绕过核酸隔离步骤的无唾液唾液测试的发展使得测试更快，更便宜，独立于供应链问题（唾液和I-Covid，Vogels等，和Ranoa等人。2020分别）。这些萃取的唾液测试与鼻拭子测试的敏感性相当，并且在美国的各种大学中用于定期筛选学生，员工和运动队 - 每周频繁的两倍。

支持无萃取SARS-COV-2检测方法的发展

从原油唾液中看到大力，准确，拔除的SARS-COV-2检测，我们改编和优化了我们的金标标题III技术，为这一具有挑战性的样品类型，导致用于SARS-COV-2的直接单步RT-QPCR混合。开发新的拔除检测方法的研究人员可以从我们的简单方案开始：混合唾液样品和预处理试剂和热处理，然后将该混合物的等分试样与RT-QPCR主混合物结合并进行RT-QPCR。从预处理到检测的整个工作流程都需要不到一小时（预处理〜5分钟，实时RT-QPCR〜50分钟），使得能够快速达到结果。这种可靠方法具有高灵敏度，用于检测SARS-COV-2基因组的低拷贝数（低至10个SARS-COV-2 RNA拷贝;图2）。

图2. Direct One-Step Primescript RT-QPCR MIX使用简单的3步方案来检测跨一系列目标RNA拷贝数的SARS-COV-2。面板A.我们的简单协议需要不到一个小时才能完成。面板B.根据SARS-COV-2方案的直接单步原序列RT-QPCR混合物处理与SARS-COV-2的N1和N 2区域的合成RNA的未纯化的唾液样品进行加工，为这些目标实现阳性检测以及人类rnase p（rp），阳性对照。

光在隧道的尽头

就像从未有过一个可能会击败日出的夜晚，我们将克服这种大流行并更强大。最近批准了一些安全有效的疫苗，并且在不久的将来，将免疫众多人口，以显着降低病毒的传播。与此同时，经常和规模测试人们对控制蔓延至关重要。

它已经为全世界人民遭受了巨大的困难和痛苦，我们希望可扩展，快速，价格实惠的检测方法，例如无萃取唾液测试，将有助于遏制SARS-COV-2的传播。

参考

Blacksell，S. D.商业登革热的诊断测试点的护理方式：最近的评估和未来的需求。J. Biomed和Biotechnol那12日,物品ID 151967（2012）。

奥特,i M。等等。简单的唾液：SARS-COV-2检测的稳定性否定了对昂贵的收集设备的需求。MedRXiv。doi: 10.1101 / 2020.08.03.20165233(2020)。

Ranoa，D. R. E.等等。基于唾液的SARS-COV-2分子检测，绕过RNA提取。生物XIV。DOI：10.1101 / 2020.06.18.159434（2020）。

Wu, G.和Zaman, M. H.在低资源环境下诊断和监测艾滋病毒感染的低成本工具，世界卫生组织的公报，90，914920（2012）。

Wyllie，A. L.等等。在COVID-19患者中，唾液对SARS-CoV-2的检测比鼻咽拭子更敏感。Medrxiv。doi: https://doi.org/10.1101/2020.04.16.20067835(2020)。