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T细胞疗法

癌细胞形象

使用转基因T细胞(T淋巴细胞)靶向癌症是一种很有前途的方法,特别是对于那些难以用传统方法治疗的癌症。两种最常见的方法围绕着对T细胞进行基因工程,引入新的T细胞受体(TCR)或嵌合抗原受体(CAR) (Humphries, 2013)。过继T细胞疗法包括移除病人的T细胞,对它们进行修饰体外,然后将修饰后的细胞重新融合回同一患者体内(图1)。除了这种所谓的自体方法外,世界各地的几家公司正在开发一种疗法,这种疗法可以由一个捐赠者生产,然后用于治疗数千名患者(同种异体方法)。在这两种方法中,T细胞的修饰都发生在患者体外(体外基因治疗)。

T细胞治疗工作流程

图1所示。基于t细胞的治疗工作流程。

重点产品

在过继T细胞治疗中,高转导效率对于有效地将TCR/CAR基因导入T淋巴细胞至关重要。在这种背景下,逆转录连接蛋白GMP级试剂已用于增强病毒转导并扩大幼稚T细胞群,并根据GMP (Good Manufacturing Practice)指南作为有质量保证的产品生产。我们的RetroNectin GMP级试剂已在全球44家机构的68个基因治疗临床试验方案中使用。我们还提供gmp级抗CD3抗体对于T细胞活化以及淋巴细胞t细胞培养基,优化后可与反链粘连试剂一起使用。

RetroNectin是如何工作的?

Retronectin试剂是重组人纤连蛋白片段,其含有三个功能域:细胞结合结构域(C-结构域),肝素结合结构域(H-结构域)和CS-1序列。Retronectin试剂通过帮助靶细胞和病毒颗粒的共定位增强携带的携带术和逆转录病毒介导的基因转换。具体而言,病毒颗粒通过与H域的相互作用结合重试素试剂,并且靶细胞主要通过细胞表面整合蛋白受体VLA-5和VLA-4分别与纤连蛋白C-结构域和CS-1位点相互作用(图2)。通过促进近乎物理接近度,重试素试剂可以增强病毒介导的基因转移至表达整联蛋白受体VLA-4和VLA-5的靶细胞。

转导增强子

图2。重组人纤连蛋白片段的结构与功能。

临床应用实例

美国国立卫生研究院(National Institutes of Health,US)的Steven Rosenberg博士是过继性T细胞疗法的先驱之一,他正在进行研究TCR/CAR基因治疗的临床试验他的研究小组使用逆转录连接蛋白GMP级试剂,将带有识别癌症抗原(如MART-1、gp100或NY-ESO-1)的TCR/CAR基因的患者源性淋巴细胞转化为治疗药物(Kochenderfer等人2012年;Robbins等人2011年;Zhang等人2013年)。Mie大学医院(日本)的研究人员,与Takara Bio Inc.合作,正在进行食管癌TCR/CAR基因治疗的临床研究。bet188手机端

复发性/难治性急性淋巴细胞白血病(R/R ALL)是另一种预后极差的癌症,因为可供选择的治疗方法很少。美国纪念斯隆·凯特林癌症中心的科学家报告了一种免疫治疗策略,用于治疗五名成人急性淋巴细胞白血病患者。每个患者的T细胞都被分离出来,通过引入DNA进行改变,使细胞靶向CD19,从而攻击肿瘤细胞,并注入患者的血液。据研究人员称,所有患者都实现了肿瘤根除和完全缓解。术中使用逆转录酶联蛋白GMP级试剂T细胞转导(布伦特特等人2013)。下面还列出了在临床研究中使用的临床研究中使用的重试素GMP级试剂的其他选定出版物。

甚至在10年前,我们就非常清楚,逆转录酶联蛋白涂层板的使用显著、大规模地改善了基因转移。我们许多人现在使用的方法学已经发展了很多年。一旦你有了一个有效的系统,你就会非常依赖和依赖这些试剂。”

—Brentjens博士

引用逆转录连接蛋白GMP级试剂用于TCR/CAR治疗的参考文献和选定出版物:

阿里,s。等表达抗B细胞成熟抗原嵌合抗原受体的T细胞导致多发性骨髓瘤缓解。血 128,1688–1700 (2016).

布伦特詹斯,R。等cd19靶向T细胞在化疗难治性急性淋巴母细胞白血病成人患者中迅速诱导分子缓解。科学翻译医学 5,177RA38(2013)。

过继细胞疗法:磨练杀手本能。自然 504年,S13–S15(2013年)。

Kochenderfer j . N。等抗CD19嵌合抗原受体转导T细胞临床试验中的B细胞耗竭和恶性肿瘤缓解以及细胞因子相关毒性。血 119,2709 - 2720(2012)。

Koury, J。等免疫疗法:利用免疫系统治疗癌症。J.免疫研究。 9585614(2018)。

拉莫斯,C.A。等CD30特异性嵌合抗原受体重定向淋巴细胞后的临床和免疫反应。J.Clin。投资。 127,3462 - 71(2017)。

罗宾斯,P.F。等使用与NY-ESO-1反应的基因工程淋巴细胞治疗转移性滑膜细胞肉瘤和黑色素瘤患者的肿瘤消退。j .中国。肿瘤防治杂志。29日,917–924 (2011).

Stoncek,D. F.等外周血单个核细胞浓缩物中的髓样细胞抑制嵌合抗原受体T细胞的扩增。Cytotherapy18,893 - 901(2016)。

唐,X.Y。等用于化疗复发或难治性急性淋巴细胞白血病的第三代CD28/4-1BB嵌合抗原受体T细胞:一项非随机、开放标记I期试验方案。BMJ开放6.e013904(2016)。

托穆莱萨,C。等用于治疗B细胞急性淋巴细胞白血病的嵌合抗原受体T细胞。前面。Immunol。19日,239(2018)。

张,L.等介导IL-12诱导表达的γ-逆转录病毒载体的临床应用评价j . Immunother。35岁,430 - 439(2013)。


1.05 |将免疫细胞转化为抗癌忍者

如果你自己的免疫细胞可以战胜癌症呢?这就是癌症免疫疗法背后的理念。国家癌症研究所的Steven Rosenberg博士的团队使用逆转录连接素试剂将识别特定癌症抗原的t细胞受体基因导入患者自己的淋巴细胞中。这些经过改造的细胞随后被送回病人体内,在那里它们专门针对表达抗原的癌细胞。这是良好的科学!

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癌症战争的未来

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阅读我们的博客文章,了解CAR - t细胞治疗血癌如何显示出一种更安全、更靶向、更有效的癌症治疗的前景。

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主打产品

猫。# 产品 大小 许可证 数量 细节
T210 抗cd3单抗GMP级 1毫克/ 1毫升

许可声明

身份证号码
M69b 在购买本产品之前,您必须向我们提交一份完整的抗CD3单克隆抗体(GMP)订单检查表。点击这里可以找到Anti-CD3单抗GMP级产品许可协议的副本。
*

T210,抗CD3单克隆抗体GMP级,根据日本卫生福利部通知的以下指南“试验药物的制造控制和质量控制标准(试验药物GMP)”(PFSB通知编号:0709002,2008年7月9日)进行制造和测试(PFSB:药品和食品安全局)。

抗CD3抗体通常用于T淋巴细胞增殖协议。在许多可用克隆中,“OKT3”(小鼠IgG2a)是最常用的。根据良好生产规范(GMP)的相关指南,这种单克隆抗CD3抗体(克隆OKT3)是作为质量保证产品生产的。该产品可用于体外临床前研究和研究阶段研究中的细胞培养过程。

买方须知

本产品将用于仅用于研究,包括用于临床研究的非商业制造。本产品不适用于人体或动物体内应用。未经我方事先书面批准,我方产品不得转让给第三方、转售、改装转售或用于制造商业产品或向第三方提供服务。

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外周血单个核细胞(PBMC)的体外T细胞扩增是在单独使用抗cd3抗体或结合抗cd3和RetroNectin试剂的情况下进行的

外周血单个核细胞(PBMC)的体外T细胞扩增是在单独使用抗cd3抗体或结合抗cd3和RetroNectin试剂的情况下进行的
体外来自外周血单核细胞(PBMC)的T细胞膨胀在单独的抗CD3抗体存在下或抗CD3和逆应素试剂的组合进行。扩增后,通过表达CD45RA和CCR7评估幼稚T细胞的百分比。

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T210:抗CD3单克隆抗体GMP级

T210:抗CD3单克隆抗体GMP级
WK552 淋巴细胞扩增™无异种培养基 10 x 1L. *

淋巴酮T细胞扩增无异种培养基是专门为扩增和转导人类T淋巴细胞而配制的。该培养基经过优化,可在添加或不添加人血清或血浆的情况下实现T细胞的高效增殖。淋巴酮培养基不含除药物级人血清白蛋白和rec以外的任何蛋白质与人胰岛素结合,并提供优于其他常用无血清培养基的性能。使用淋巴酮T细胞扩增无异种培养基结合抗CD3抗体、IL-2和逆转录连接蛋白试剂激活T细胞,可增强T细胞扩增,并产生更高比例的幼稚T细胞hes使用IL-2结合抗CD3和抗CD28抗体。淋巴酮培养基也含有L-谷氨酰胺和链霉素,并被证实具有较低的内毒素水平(<0.3 EU/ml)。

目录# WK552包括10个1升瓶的介质。

买方须知

我们的产品将用于研究用途. 不得用于任何其他目的,包括但不限于用于人体、治疗或诊断用途或任何类型的商业用途。未经我方事先书面批准,我方产品不得转让给第三方、转售、改装转售或用于制造商业产品或向第三方提供服务。

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淋巴酮培养基可在不添加血清或血浆的情况下实现T细胞的高效扩增

淋巴酮培养基可在不添加血清或血浆的情况下实现T细胞的高效扩增

使用各种无血清培养基进行t细胞扩增比较。从两名健康献血者的血液中分离外周血单个核细胞(PBMC),并在抗CD3单克隆抗体和IL-2的刺激下,在CultiLife 215培养袋中使用淋巴酮T细胞扩增异种培养基GT-T551(Takara Bio)、X-VIVO 15(Lonza)或AIM V(Thermo Fisher Scientific)培养四天。然后将细胞以适当稀释液在补充有IL-2的各培养基中再培养10天。到第14天,在淋巴酮培养基中培养的细胞显示出比在其他三种培养基中培养的细胞更高的倍数扩增。bet188手机端

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添加人血清的淋巴细胞培养基可使T细胞更大的扩张,并产生更高比例的初代T细胞

添加人血清的淋巴细胞培养基可使T细胞更大的扩张,并产生更高比例的初代T细胞

在人血清存在或不存在的情况下,通过抗cd3抗体、IL-2和RetroNectin刺激t细胞扩增。外周血单个核细胞(PBMCs)在抗cd3单克隆抗体、IL-2和RetroNectin试剂刺激下培养4天,在CultiLife 215培养袋中加入或不加入人血清,使用的是淋巴细胞t细胞扩增Xeno-Free培养基、X-VIVO 15 (Lonza)或AIM V (Thermo Fisher Scientific)。然后将细胞在含或不含血清的适当稀释浓度下分别在含有IL-2的培养基中培养6天。第0 ~ 7天以1%浓度添加人血清,第7 ~ 10天以0.5%浓度添加人血清。前面板。到第10天,无论是否添加血清,在淋巴细胞培养基中培养的细胞都比在其他两种培养基中培养的细胞表现出更高的倍膨胀。底部面板。淋巴酮培养基中的扩增也导致较高比例的细胞表达与幼稚T细胞表型(CD45RA)相关的标记物+/CCR7+).

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无血清T细胞扩增方案示意图

无血清T细胞扩增方案示意图

T细胞膨胀协议采用重试素试剂,淋巴酮异叶培养基,文化袋和抗CD3 mAb。

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WK552S:淋巴细胞t细胞扩增无异种培养基

WK552S:淋巴细胞t细胞扩增无异种培养基

标准的1,000毫升瓶子为典型的t淋巴细胞扩增方案提供了足够的培养基。

T202 Retronectin®MPP等级 2.5毫升

许可声明

身份证号码
M69. 该产品由日本专利No.4406566的权利要求及其外国对应专利权利要求涵盖。
M69a 在购买本产品之前,您必须向我们提交一份完整的RetroNectin®(GMP)订购单副本。点击此处可找到retroonectin®GMP级产品许可协议的副本。
*

T202, RetroNectin GMP级,按照以下指南生产和测试,由日本厚生省通报的“研究产品生产控制和质量控制等标准(研究产品GMP)”(“PFSB通报No. 0709002, July 9, 2008)(药物及食物安全局)。

逆转录连接蛋白试剂是重组人纤维连接蛋白片段(也称为rFN-CH-296)的63 kD片段这提高了慢病毒和逆转录病毒介导的基因转导效率。这对造血细胞和其他难以转染的细胞类型尤为重要。增强的转导被认为是病毒颗粒和靶细胞共定位的结果。这是通过病毒颗粒与sequ的直接结合来实现的rFN-CH-296中的肝素结合结构域和靶细胞整合素与其他两个结构域的相互作用。根据良好生产规范(GMP)的相关指南,逆转录连接蛋白GMP级产品作为质量保证产品生产。该产品可用于体外临床应用。研究人员可自由使用本产品进行基于研究的临床试验。在基于研究的临床试验中使用GMP级产品之前,需要获得适当的监管批准,因为这些试验可能需要特殊考虑或更严格的制造标准。本产品不适用于为人类在活的有机体内应用。最终用户有责任确保最终产品满足其使用申请的要求。Takara Bio Inc.已向食品和药物管理局提交了一份药品主文件(DMF申请号18898),以获得RetroNectin GMP等级。bet188手机端

买方须知

本产品将用于仅用于研究,包括用于临床研究的非商业制造。本产品不适用于人体或动物体内应用。未经我方事先书面批准,我方产品不得转让给第三方、转售、改装转售或用于制造商业产品或向第三方提供服务。

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比较各种常用方案的T细胞扩展效率

比较各种常用方案的T细胞扩展效率

比较各种常用方案的T细胞扩展效率。与其他方案相比,使用逆转录连接蛋白和α-CD3共同刺激的细胞显示出更高的倍数扩增(面板).此外,Retronectin的存在促进了已经显示在体内抗肿瘤活性中具有更好的幼稚状T细胞(CCR7 + / CD45RA +表型)的产生(B小组).

注意:该扩容方式需要商用license支持。

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不同公司转导增强剂的K562细胞系逆转录转导的比较

不同公司转导增强剂的K562细胞系逆转录转导的比较

不同公司转导增强剂的K562细胞系逆转录病毒转导的比较。一个K562细胞系在存在各种转导增强子的情况下用逆转录病毒载体进行转导。与其他三家公司的其他转导增强子(包括聚布伦、硫酸鱼精蛋白和人纤维连接蛋白)相比,逆转录连接蛋白产生了更高的转导效率。

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与聚苯乙烯相比,逆转录连接素可有效转导人PBMCs

与聚苯乙烯相比,逆转录连接素可有效转导人PBMCs

与聚布伦相比,使用逆转录连接蛋白高效转导人外周血单个核细胞。用不同稀释度的慢病毒编码基因转导人外周血单个核细胞ZsGreen1在压蛋白或聚酶的存在下,通过流式细胞术测量转导的CD8 +细胞的百分比。具有重量素的转导效率显着高于使用含有氨基乙烯的转导效率,特别是在低MOI(90x稀释)下。

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使用逆转录连接蛋白试剂进行T细胞扩增。

使用逆转录连接蛋白试剂进行T细胞扩增。

使用逆转录连接蛋白试剂进行T细胞扩增。使用抗CD3(克隆OKT3)和IL-2单独或与逆转录连接蛋白试剂(RN)、抗CD28或抗4-1BB联合使用在体外刺激和扩增外周血T细胞。用逆转录连接蛋白试剂刺激产生更高比例的细胞毒性CD8+T细胞。

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仅供研究使用。不适用于诊断程序(如具体说明)。

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