选择检测测定的最佳样品预备方法
基于核酸的方法用于检测各种样品类型中的病毒和细菌病原体，包括临床研究和环境样品。检测方法的准确性和效率如实时定量PCR（RT-QPCR）分析和基于PCR的基因分型通常难以纯化来自待分析的样品的高质量RNA和DNA。重要的是选择一种适用于给定样品类型和生物的纯化方法，简单且足够快，以避免显着增加完成检测测定所需的时间，并适用于所处理的样品数量和样品数量。
二氧化硅膜 - 和基于磁珠的技术允许在不同的吞吐量使用手动或自动处理的病毒和微生物核酸的快速纯化。这些技术已被纳入多功能含有难裂解的微生物适用于广泛范围的样品，以及专门的试剂盒设计用于特异性纯化格式和样品类型，如粪便，土壤，和水样的试剂盒。或者，一些RT-qPCR的方法非常适合于从粗提取物中的小规模检测，消除了现有的DNA或RNA分离完全的需要。
请参阅以下相关例子，并查看我们的选择指南寻找适合您应用的最佳核酸纯化试剂盒。
请注意，machery - nagel核酸纯化产品仅在北美、印度和日本的Takara Bio提供。bet188手机端
准备用于病毒检测的临床研究样本
bet188手机端Takara Bio提供二氧化硅膜和磁珠为基础的技术，用于从无细胞的体液中纯化病毒核酸，如血清或血浆，血液，均质组织和粪便样本悬液，以及拭子清洗NucleoSpin RNA病毒和核磁病原体板。两种试剂盒都包含简单，快速的裂解程序，使从RNA和DNA病毒有效分离核酸，而NucleoMag病原体提供了更多的多功能性提取细菌DNA。提取的核酸分别与二氧化硅膜或顺磁珠结合，经过顺序洗涤步骤，然后在低盐条件下洗脱。而核ospin二氧化硅膜技术可用于单准备和多准备格式(Nucleospin 8/96病毒套件年代)针对不同的吞吐量需求，主要开发了NucleoMag病原体试剂盒，用于在许多常见的自动化平台上进行高吞吐量处理。下表比较了这三种工具包的特点。
| NucleoSpin RNA病毒 | Nucleospin 8/96病毒＊ | 核磁病原体 | |
|---|---|---|---|
| 技术 | 硅胶膜 | 硅胶膜 | 磁珠 |
| 格式 | 迷你旋转柱 | 8孔条/ 96孔板 | 高活性超顺磁珠 |
| 加工 | 小型手动处理 | 高吞吐手动或自动化处理* | 高通量手动或自动化处理 |
| 原料 | 150微升 | 150微升 | <200μl. （PREP是完全可扩展） |
| 片段大小 | 100 bp-30 kb | 100 bp-30 kb | 300 bp-〜50 kb |
| 洗脱量 | 50μl. | 70 - 100µl | 50-100μl. |
| 准备时间 | 30分钟/ 4 - 6预备 | 60分钟/ 6条 60分钟/板 |
45 - 120分钟/ 96预备 (例如，翠鸟45分钟) |
* Nucleospin 8病毒和核棘素96病毒以离心机或真空进行手动样品处理。Nucleospin 8/96病毒芯套件不包括手动使用所需的组件，主要用于真空自动样品加工。
这些试剂盒可产生高质量的病毒核酸，可用于多种样本类型的检测分析。它们能够从鼻咽和口咽拭子、痰液和其他体液等临床研究样本中有效分离病毒核酸。我们提供从这类样本中分离核酸的指南适用于SARS-CoV-2研究应用。核ospin RNA病毒试剂盒也被证明可用于HCV、HIV、HPV、禽流感病毒和蓝舌病毒，并可通过添加蛋白酶K消化步骤用于纯化HBV DNA。NucleoMag病原体试剂盒也可以从大量的病毒和细菌中纯化核酸。结果显示，它在更敏感的基于pcr的五种常见病原体(诺如病毒，艰难梭状芽胞杆菌在两个试剂盒中用于从粪便样品中提取核酸后，Astrovirus，腺病毒和轮状病毒（图1）。
图1所示。人类粪便标本病原菌检测的敏感性筛选．稀释级数10－3-10年－4粪便样品都为灵敏度使用三个重复筛选制备。用核磁病原体试剂盒和竞争对手试剂盒“R”进行核酸萃取。使用RIDA基因的病毒凳面板I（R-Biopharm公司）和REALSTAR进行PCR分析艰难梭状芽胞杆菌PCR试剂盒1.0（阿尔托纳Diagnostics）上。
环境样品中微生物DNA和RNA的分离
bet188手机端Takara Bio还提供专门的套件，可有效地将病毒核酸与水，空气和土壤等环境样品分离。磁珠基核磁DNA / RNA水套件实现高效，高通量DNA和RNA的从不同的水和空气样品隔离。该协议结合了用于最佳裂解陶瓷珠均质化和有效地除去抑制性化合物，以确保下游检测的最佳性能。这种多用途的试剂盒中所示，得到的是可以从选择使用PCR测定法（图2）的各种水和空气采样来有效地检测微生物DNA。
图2。高效检测不同水和空气样品中的微生物DNA。使用核磁DNA / RNA水试剂盒从各种过滤水和空气样品中提取DNA，并通过PCR分析。可以对所有样品有效地测量微生物DNA，证明了核磁DNA / RNA水试剂盒的多功能性。
其他套件，如NucleoBond RNA土壤和核盈宝rna凳子，可用于从水样中分离病毒核酸。我们提供一般建议用于从水样中分离病毒核酸，如SARS-CoV-2 RNA。
粗提物中病原菌的直接检测
直接RT-QPCR可用于直接从各种粗糙生物样品中检测病原体，消除了RNA纯化的需要。我们的primedirect探针RT-QPCR混合可用于直接RT-qPCR检测，因为它对肝素(血液)和腐殖酸(土壤)等多种PCR抑制剂具有高抗性。这种主混合，用于执行高灵敏度的基于荧光探针的分析，使直接一步检测在单一管，显著减少动手时间和污染的风险。使用这种混合物进行的H1N1检测显示高度敏感，在鼻腔拭子样本和唾液样本中检测到20个拷贝病毒，在口腔样本中检测到2个拷贝病毒(图3)。
图3. primedirect探针RT-QPCR混合物能够直接从生物样品中检测病毒RNA。鼻腔拭子和唾液标本的检测灵敏度为20份，口腔拭子标本的检测灵敏度为2份。
bet188手机端Takara Bio也提供用于SARS-COV-2的直接单步RT-QPCR混合，一种专门的一步RT-QPCR主混合物，允许在简单，快速的协议中直接检测来自未纯化的唾液样品 - 只需混合样品和预处理试剂，热处理，然后与RT-结合QPCR主混音。通过检测到预处理的整个协议需要不到一小时，并且包括多路复用SARS-COV-2检测的准则。该主混合物基于特殊敏感的步骤primescript III RT-QPCR混合物，可在粗唾液样品中提供SARS-COV-2 RNA的可靠检测。
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