为你的检测方法选择最好的样品准备方法
基于核酸的方法被用于检测多种样本类型的病毒和细菌病原体，包括临床研究和环境样本。实时定量PCR (RT-qPCR)分析和基于PCR的基因分型等检测方法的准确性和效率往往因难以从待分析的样本中纯化高质量的RNA和DNA而受到限制。重要的是要选择一种适合给定样品类型和生物的纯化方法，足够简单和快速，以避免显著增加完成检测分析所需的时间，并适合样品的数量和正在处理的样品数量。
以二氧化硅膜和磁珠为基础的技术允许使用手动或自动处理在各种吞吐量的病毒和微生物核酸的快速纯化。这些技术已被纳入适用于各种样品的多功能工具包，以及专门设计用于特定净化格式和样品类型的工具包，如粪便、土壤和水样，其中含有难以溶解的微生物。另外，一些RT-qPCR方法非常适合从粗提物中进行小规模检测，完全不需要先前的DNA或RNA分离。
请参阅以下相关例子，并查看我们的选择指南寻找适合您应用的最佳核酸纯化试剂盒。
请注意，machery - nagel核酸纯化产品仅在北美、印度和日本的Takara Bio提供。bet188手机端
准备用于病毒检测的临床研究样本
bet188手机端Takara Bio提供二氧化硅膜和磁珠为基础的技术，用于从无细胞的体液中纯化病毒核酸，如血清或血浆，血液，均质组织和粪便样本悬液，以及拭子清洗NucleoSpin RNA病毒和NucleoMag病原体板。两种试剂盒都包含简单，快速的裂解程序，使从RNA和DNA病毒有效分离核酸，而NucleoMag病原体提供了更多的多功能性提取细菌DNA。提取的核酸分别与二氧化硅膜或顺磁珠结合，经过顺序洗涤步骤，然后在低盐条件下洗脱。而核ospin二氧化硅膜技术可用于单准备和多准备格式(核ospin 8/96病毒试剂盒年代)针对不同的吞吐量需求，主要开发了NucleoMag病原体试剂盒，用于在许多常见的自动化平台上进行高吞吐量处理。下表比较了这三种工具包的特点。
| NucleoSpin RNA病毒 | NucleoSpin 8/96病毒＊ | NucleoMag病原体 | |
|---|---|---|---|
| 技术 | 硅膜 | 硅膜 | 磁珠 |
| 格式 | 微型旋转列 | 8-well条/ 96 -孔板 | 高活性超顺磁珠 |
| 处理 | 小型手动处理 | 高通量手动或自动化处理* | 高通量手动或自动化处理 |
| 起始物料 | 150µl | 150µl | < 200µl (prep是完全可伸缩的) |
| 片段大小 | 100 bp-30 kb | 100 bp-30 kb | 300bp ~ 50kb |
| 洗脱体积 | 50µl | 70 - 100µl | 50 - 100µl |
| 准备时间 | 30分钟/ 4 - 6预备 | 60分钟/ 6条 60分钟/板 |
45 - 120分钟/ 96预备 (例如，翠鸟45分钟) |
*NucleoSpin 8病毒和NucleoSpin 96病毒的格式可通过离心机或真空进行手动样品处理。核仁自旋8/96病毒核心试剂盒不包括手动使用所需的组件，主要用于真空下的自动样品处理。
这些试剂盒可产生高质量的病毒核酸，可用于多种样本类型的检测分析。它们能够从鼻咽和口咽拭子、痰液和其他体液等临床研究样本中有效分离病毒核酸。我们提供从这类样本中分离核酸的指南适用于SARS-CoV-2研究应用。核ospin RNA病毒试剂盒也被证明可用于HCV、HIV、HPV、禽流感病毒和蓝舌病毒，并可通过添加蛋白酶K消化步骤用于纯化HBV DNA。NucleoMag病原体试剂盒也可以从大量的病毒和细菌中纯化核酸。结果显示，它在更敏感的基于pcr的五种常见病原体(诺如病毒，艰难梭状芽胞杆菌(星形病毒、腺病毒和轮状病毒)，然后用这两种试剂盒从粪便样本中提取核酸(图1)。
图1所示。人类粪便标本病原菌检测的敏感性筛选．稀释级数10－3-10年－4粪便标本的敏感性筛选，采用3个重复。用NucleoMag病原试剂盒和竞争对手试剂盒“R”进行核酸提取。采用RIDA基因病毒粪便面板I (R-Biopharm)和RealStar进行PCR分析艰难梭状芽胞杆菌PCR试剂盒1.0 (Altona Diagnostics)。
从环境样品中分离微生物DNA和RNA
bet188手机端Takara Bio还提供了专门的试剂盒，可以有效地从水、空气和土壤等环境样本中分离病毒核酸。磁bead-based核酸/RNA水试剂盒能够从不同的水和空气样本中高效、高通量分离DNA和RNA。该方案采用陶瓷珠均质，以优化裂解和有效去除抑制化合物，以确保下游检测的最佳性能。该多功能试剂盒可以通过PCR检测多种水和空气样品中的微生物DNA(图2)。
图2。高效检测不同水和空气样品中的微生物DNA。使用NucleoMag DNA/RNA water试剂盒从各种过滤水和空气样品中提取DNA，并进行PCR分析。所有样品的微生物DNA都可以被有效地测量，证明了NucleoMag DNA/RNA水试剂盒的多功能性。
其他套件，如NucleoBond RNA土壤和NucleoSpin RNA凳子，可用于从水样中分离病毒核酸。我们提供一般建议用于使用这些试剂盒从水样中分离病毒核酸，如SARS-CoV-2 RNA。
粗提物中病原菌的直接检测
直接RT-qPCR可用于从各种原始生物样品中直接检测病原体，无需RNA纯化。我们的PrimeDirect Probe RT-qPCR Mix可用于直接RT-qPCR检测，因为它对肝素(血液)和腐殖酸(土壤)等多种PCR抑制剂具有高抗性。这种主混合，用于执行高灵敏度的基于荧光探针的分析，使直接一步检测在单一管，显著减少动手时间和污染的风险。使用这种混合物进行的H1N1检测显示高度敏感，在鼻腔拭子样本和唾液样本中检测到20个拷贝病毒，在口腔样本中检测到2个拷贝病毒(图3)。
图3。PrimeDirect Probe RT-qPCR Mix能够直接从生物样本中检测病毒RNA。鼻腔拭子和唾液标本的检测灵敏度为20份，口腔拭子标本的检测灵敏度为2份。
bet188手机端Takara Bio也提供SARS-CoV-2的直接一步RT-qPCR混合，这是一种专门的一步式RT-qPCR主混合，允许从未纯化的唾液样本中直接检测SARS-CoV-2，只需将样品和预处理试剂混合，热处理，然后与RT-qPCR主混合混合。整个方案，从预处理到检测，不到一个小时，包括多路SARS-CoV-2检测指南。这一主混合，基于异常敏感的One Step PrimeScript III RT-qPCR mix，证明可以可靠地检测唾液粗样本中的SARS-CoV-2 RNA。
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