强大、多功能的SARS-CoV-2检测

快速、可靠、大规模检测新出现的冠状病毒SARS-CoV-2对于控制冠状病毒-19大流行至关重要。一种有效的SARS-CoV-2检测方法必须能够以简化样品制备和处理以降低污染风险的简化方案检测病毒的几份拷贝，提供快速、准确和可重复的结果，并且每天可以处理大量样品。

实时定量PCR (Real-time quantitative PCR, RT-qPCR)是基因表达分析的有力工具，是多种病毒检测方法的基础。目前已有许多基于rt - qpcr的专门检测方法，可用于制定有效的SARS-CoV-2检测方案。一步RT-qPCR允许高效，特异性的cDNA合成和扩增在一个管，减少样品处理时间和最大限度地减少污染的风险。直接RT-qPCR允许从原始的生物样本中直接检测病毒，在保持准确性和敏感性的同时，消除了耗时的RNA纯化的需要。自动化、高通量SARS-CoV-2检测使大规模样品处理具有精度、重现性和速度。

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一步RT-qPCR检测灵敏可靠

当首次发现SARS-CoV-2时，Takara Bio的一步式PrimeScbet188手机端ript RT-qPCR技术被用于开发首个SARS-CoV-2筛查试验(Zhu et al. 2020)。这些高质量的试剂，在ISO 13485:2016条件下生产，已在联邦药品管理局(FDA)颁发的多个紧急使用授权中使用Ipsum诊断,有限责任公司，哈肯萨克大学医学中心，及LifeHope实验室COVID-19测试。我们的RT-qPCR试剂盒，包括One Step PrimeScript III RT-qPCR Mix，这是市场上最敏感的一步式RT-qPCR主混合，与已建立的引物一起继续在全球范围内使用，用于检测SARS-CoV-2至5个病毒拷贝(图1)。

图1所示。可靠检测SARS-CoV-2在5,50,500,5,000,50,000拷贝一步RT-qPCR试剂盒．这些数据是由Takara Bio利用CDC的公开协议生成的bet188手机端。这些数据还没有得到CDC的验证。

此外，在两项独立的研究中，研究者证实了One-Step PrimeScript III RT-qPCR Mix的性能优于其他一步RT-qPCR溶液:

2020年4月bioRxiv纸，棕色（的）et al。来自大奥蒙德街医院(NHS，伦敦，英国)的研究人员进行了比较一步PrimeScript III RT qPCR混合为测试SARS-CoV-2检测的相容性和敏感性，向三家领先的竞争对手进行测试。作者表明该试剂盒的检测下限是竞争产品的10 ~ 100倍．他们还证明PrimeScript III一步RT-qPCR灵敏度的提高减少了假阴性的数量。本研究还比较了所有混合物的整体反应速度，并证明PrimeScript III一步RT-qPCR混合物在灵敏度和速度方面优于其他一步RT-qPCR溶液。

2020年7月medRxiv纸, Reijnset al。来自爱丁堡大学的研究人员也发现，在对患者样本进行多重反应时，One-Step PrimeScript III RT-qPCR Mix表现出了更高的敏感性。重要的是，他们报告说，这种混合物能够在以前用竞争对手试剂盒发现的阴性样本中检测到病毒RNA。此外，他们还报告说，使用Takara Bio mix开发的试剂盒的价格是其他试剂盒的十分之一。bet188手机端这些数据加强了我们在检测SARS-CoV-2方面的出色表现和价值。

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直接从原始生物样本中检测病毒，不提取RNA

我们的直接RT-qPCR混合物可以直接用于多种类型的生物样品，不需要RNA纯化，节省宝贵的时间和资源。SARS-CoV-2直接一步RT-qPCR Mix是专为未纯化唾液样本设计的，能够准确的一步RT-qPCR检测病毒的存在和数量。整个不提取RNA的方案花费不到一个小时，可以用于同时处理多个样品(图2，面板A)。由于该混合物是基于异常敏感的one Step PrimeScript III RT-qPCR mix，人们可以期待它提供类似的敏感性。Direct One-Step PrimeScript RT-qPCR Mix对SARS-CoV-2和未纯化的唾液样本的性能通过一系列目标RNA拷贝数得到了证实(图2，面板B)。

图2。的SARS-CoV-2的直接一步PrimeScript RT-qPCR Mix使用一个简单的3步方案检测唾液样本中的SARS-CoV-2的一系列目标RNA拷贝数。面板。我们的简单协议不到一小时就完成了。面板B。采用Direct One-Step PrimeScript RT-qPCR Mix for SARS-CoV-2方案，对添加SARS-CoV-2 N1和N2区域合成RNA的未纯化唾液样品进行处理，并对这些靶点和阳性对照人RNase P (RP)进行阳性检测。

使用以下方法可以直接从各种生物样本（如病毒、细菌、培养细胞、全血和粪便样本）进行RT-qPCR：PrimeDirect Probe RT-qPCR Mix．利用这一技术开发了许多SARS-CoV-2检测方案指南。Lubkeet al。他们的简单描述SARS-CoV-2检测协议在《临床病毒学杂志》上发表的一篇论文中，使用PrimeDirect Probe RT-qPCR Mix对呼吸道样本进行了检测。

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工具书类

• 哈肯萨克大学医学中心(HUMC)分子病理学实验室CDI增强COVID-19检测EUA摘要(2020年4月15日)。可以在:https://www.fda.gov/media/137036/download
• COV-19 IDx检测EUA摘要，Ipsum Diagnostics, LLC(2020年4月1日)。可以在:https://www.fda.gov/media/136621/download
• 布朗，J.R。et al。SARS-CoV2 N基因实时RT-PCR靶点与市售主混合物的比较。bioRxiv2020.04.17.047118; 内政部：https://doi.org/10.1101/2020.04.17.047118
• Lubke, N。et al。无提取的SARS-CoV-2快速RT-qPCR检测，适用于所有初级呼吸材料。中国。性研究。130年,104579(2020)。可以在:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7405857/
• Reijns, m。et al。一种灵敏、经济的多重RT-qPCR检测SARS-CoV-2的方法。medRxiv2020.07.14.20154005; 内政部：https://doi.org/10.1101/2020.07.14.20154005
• 朱，N。et al。一种新型冠状病毒来自2019年中国肺炎患者。心血管病。j .地中海。NEJMoa2001017 (2020);doi:https://www.nejm.org/doi/full/10.1056/NEJMoa2001017
  
  • 朱et al。补充附录:RT-qPCR方案及使用的引物