克服测试开发过程中的障碍以改进农村医院新冠病毒-19测试(5分钟)
当传统的RNA提取方法不能减少它时——延长了周转时间,并限制了印第安纳地区医疗中心COVID-19检测的能力。Bharathan是IUP生物系的系主任,他和他的实验室使用Takara Bio的PrimeDirect Probe混合物开发了一种快速、敏感的无提取方案。bet188手机端
新出现的冠状病毒SARS-COV-2的快速,可靠,大规模检测对于控制Covid-19大流行至关重要。有效的SARS-COV-2检测方法必须能够以简化的协议中的一些病毒副本,简化样品制备和处理,以降低污染的风险,提供快速,精确,可重复的结果,并可以处理每天大量样品。
实时定量PCR(RT-qPCR)是基因表达分析的有力工具,为多种病毒检测方法奠定了基础。许多基于RT-qPCR的专门检测方法可用于制定有效的SARS-CoV-2检测协议。一步RT-qPCR允许在单管中高效、特异的cDNA合成和扩增,减少样品处理时间,并将污染风险降至最低。直接RT-qPCR允许直接从原始生物样品中检测病毒,无需耗时的RNA纯化,同时保持准确性和灵敏度。自动化、高通量SARS-CoV-2检测使大规模样本处理具有精度、再现性和速度。
当首次发现SARS-CoV-2时,Takara Bio的一步PrimeScrbet188手机端ipt RT qPCR技术被用于开发第一个SARS-CoV-2筛查试验(Zhu等人,2020年)。这些在ISO 13485:2016条件下生产的高质量试剂已用于美国联邦药品管理局(FDA)颁发的多项紧急使用授权,以Ipsum诊断,有限责任公司,哈肯萨克大学医学中心, 和生命希望实验室对于COVID-19测试。我们的RT-qPCR的工具包,其中包括一个步骤PrimeScript III RT-qPCR混合物,是市场上最敏感的一步RT-qPCR的主结构,继续与SARS-COV-2的灵敏的检测建立引全球范围内使用向下至五个病毒拷贝(图1)。
图1.在5份、50份、500份、5000份和50000份样本中对SARS-CoV-2的可靠检测我们的一步法RT-qPCR的套件.这些数据是由Takara Bio利用CDC的公开协议生成的bet188手机端。这些数据还没有得到CDC的验证。
此外,在两项独立的研究中,研究者证实了One-Step PrimeScript III RT-qPCR Mix的性能优于其他一步RT-qPCR溶液:
在2020年四月bioRxiv纸,棕色(的)等等。从大奥蒙德街医院(NHS,英国伦敦),相比一个步骤primescript III RT-QPCR混合到三个领先的竞争对手,以测试SARS-COV-2检测的兼容性和敏感性。作者表明了这一点该试剂盒的检测下限是竞争产品的10 ~ 100倍.他们还证明了Primesscript III一步RT-QPCR的敏感性增加了减少了假底片的数量。该研究还比较了所有混合物的整体反应速度,并证明了Primescript III一步RT-QPCR混合在敏感度和速度均匀地优于其他一步的RT-QPCR溶液。
2020年7月medRxiv纸,Reijns等等。来自爱丁堡大学的研究人员也发现,在对患者样本进行多重反应时,One-Step PrimeScript III RT-qPCR Mix表现出了更高的敏感性。重要的是,他们报告说,这种混合物能够在以前用竞争对手试剂盒发现的阴性样本中检测到病毒RNA。此外,他们还报告说,使用Takara Bio mix开发的试剂盒的价格是其他试剂盒的十分之一。bet188手机端这些数据加强了我们在检测SARS-CoV-2方面的出色表现和价值。
我们的直接RT-qPCR混合物可以直接用于多种类型的生物样品,不需要RNA纯化,节省宝贵的时间和资源。SARS-CoV-2直接一步RT-qPCR Mix是专为未纯化唾液样本设计的,能够准确的一步RT-qPCR检测病毒的存在和数量。整个不提取RNA的方案花费不到一个小时,可以用于同时处理多个样品(图2,面板A)。由于该混合物是基于异常敏感的one Step PrimeScript III RT-qPCR mix,人们可以期待它提供类似的敏感性。Direct One-Step PrimeScript RT-qPCR Mix对SARS-CoV-2和未纯化的唾液样本的性能通过一系列目标RNA拷贝数得到了证实(图2,面板B)。
图2.SARS-CoV-2的直接一步PrimeScript RT-qPCR Mix使用一个简单的三步方案在一系列靶RNA拷贝数范围内检测唾液样本中的SARS-CoV-2。A小组。我们简单的协议,只需要不到一个小时才能完成。面板B.采用Direct One-Step PrimeScript RT-qPCR Mix for SARS-CoV-2方案,对添加SARS-CoV-2 N1和N2区域合成RNA的未纯化唾液样品进行处理,并对这些靶点和阳性对照人RNase P (RP)进行阳性检测。
来自各种生物样品的直接RT-QPCR,例如病毒,细菌,培养细胞,全血和粪便样本是可能的PrimeDirect Probe RT-qPCR Mix.利用这一技术开发了许多SARS-CoV-2检测方案指南。Lubke等等。描述了他们简单SARS-CoV的-2检测协议在《临床病毒学杂志》论文中使用PrimeDirect探针RT-qPCR混合检测呼吸道样本。
的SmartChip Real-Time PCR系统自动化SARS-CoV-2检测,允许处理大量样品的精度、重复性和速度。它能最大限度地减少假阳性和假阴性,准确地捕获抄本,精确到单位数副本,减少动手时间,并最大限度地增加每天处理的样本数量。这个系统是一个完整的解决方案,包括芯片和试剂,每天可以处理数千个样品。5184孔芯片的每口井都有纳米升级的反应体积,消除了预放大步骤,降低了可变性并降低了成本。
我们从SmartChip实时PCR系统上产生了概念证明数据,该测定是指示人RNase P和病毒核衣壳基因的敏感和可再现检测。此外,我们制定了一个内部的Smartchip协议,以检测SARS-COV-2。注册观看描述完整数据集的网络研讨会。
如resistance map联合创始人兼首席执行官Windi Muziasari博士在网络研讨会上所述,SmartChip Real-Time PCR系统已被用于检测和量化废水中的抗生素耐药基因和SARS-CoV-2,这可以揭示COVID-19传播的重要信息。注册观看网络研讨会并了解如何进行。
当传统的RNA提取方法不能减少它时——延长了周转时间,并限制了印第安纳地区医疗中心COVID-19检测的能力。Bharathan是IUP生物系的系主任,他和他的实验室使用Takara Bio的PrimeDirect Probe混合物开发了一种快速、敏感的无提取方案。bet188手机端
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