功能强大，多功能SARS-COV-2检测

新出现的冠状病毒SARS-COV-2的快速，可靠，大规模检测对于控制Covid-19大流行至关重要。有效的SARS-COV-2检测方法必须能够以简化的协议中的一些病毒副本，简化样品制备和处理，以降低污染的风险，提供快速，精确，可重复的结果，并可以处理每天大量样品。

实时定量PCR（RT-qPCR）是基因表达分析的有力工具，为多种病毒检测方法奠定了基础。许多基于RT-qPCR的专门检测方法可用于制定有效的SARS-CoV-2检测协议。一步RT-qPCR允许在单管中高效、特异的cDNA合成和扩增，减少样品处理时间，并将污染风险降至最低。直接RT-qPCR允许直接从原始生物样品中检测病毒，无需耗时的RNA纯化，同时保持准确性和灵敏度。自动化、高通量SARS-CoV-2检测使大规模样本处理具有精度、再现性和速度。

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一步RT-qPCR检测病毒的灵敏度高、可靠性高

当首次发现SARS-CoV-2时，Takara Bio的一步PrimeScrbet188手机端ipt RT qPCR技术被用于开发第一个SARS-CoV-2筛查试验（Zhu等人，2020年）。这些在ISO 13485:2016条件下生产的高质量试剂已用于美国联邦药品管理局（FDA）颁发的多项紧急使用授权，以Ipsum诊断,有限责任公司，哈肯萨克大学医学中心， 和生命希望实验室对于COVID-19测试。我们的RT-qPCR的工具包，其中包括一个步骤PrimeScript III RT-qPCR混合物，是市场上最敏感的一步RT-qPCR的主结构，继续与SARS-COV-2的灵敏的检测建立引全球范围内使用向下至五个病毒拷贝（图1）。

图1.在5份、50份、500份、5000份和50000份样本中对SARS-CoV-2的可靠检测我们的一步法RT-qPCR的套件．这些数据是由Takara Bio利用CDC的公开协议生成的bet188手机端。这些数据还没有得到CDC的验证。

此外，在两项独立的研究中，研究者证实了One-Step PrimeScript III RT-qPCR Mix的性能优于其他一步RT-qPCR溶液:

在2020年四月bioRxiv纸，棕色（的）等等。从大奥蒙德街医院（NHS，英国伦敦），相比一个步骤primescript III RT-QPCR混合到三个领先的竞争对手，以测试SARS-COV-2检测的兼容性和敏感性。作者表明了这一点该试剂盒的检测下限是竞争产品的10 ~ 100倍．他们还证明了Primesscript III一步RT-QPCR的敏感性增加了减少了假底片的数量。该研究还比较了所有混合物的整体反应速度，并证明了Primescript III一步RT-QPCR混合在敏感度和速度均匀地优于其他一步的RT-QPCR溶液。

2020年7月medRxiv纸，Reijns等等。来自爱丁堡大学的研究人员也发现，在对患者样本进行多重反应时，One-Step PrimeScript III RT-qPCR Mix表现出了更高的敏感性。重要的是，他们报告说，这种混合物能够在以前用竞争对手试剂盒发现的阴性样本中检测到病毒RNA。此外，他们还报告说，使用Takara Bio mix开发的试剂盒的价格是其他试剂盒的十分之一。bet188手机端这些数据加强了我们在检测SARS-CoV-2方面的出色表现和价值。

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从粗的生物样品，而无需RNA提取直接病毒检测

我们的直接RT-qPCR混合物可以直接用于多种类型的生物样品，不需要RNA纯化，节省宝贵的时间和资源。SARS-CoV-2直接一步RT-qPCR Mix是专为未纯化唾液样本设计的，能够准确的一步RT-qPCR检测病毒的存在和数量。整个不提取RNA的方案花费不到一个小时，可以用于同时处理多个样品(图2，面板A)。由于该混合物是基于异常敏感的one Step PrimeScript III RT-qPCR mix，人们可以期待它提供类似的敏感性。Direct One-Step PrimeScript RT-qPCR Mix对SARS-CoV-2和未纯化的唾液样本的性能通过一系列目标RNA拷贝数得到了证实(图2，面板B)。

图2.SARS-CoV-2的直接一步PrimeScript RT-qPCR Mix使用一个简单的三步方案在一系列靶RNA拷贝数范围内检测唾液样本中的SARS-CoV-2。A小组。我们简单的协议，只需要不到一个小时才能完成。面板B.采用Direct One-Step PrimeScript RT-qPCR Mix for SARS-CoV-2方案，对添加SARS-CoV-2 N1和N2区域合成RNA的未纯化唾液样品进行处理，并对这些靶点和阳性对照人RNase P (RP)进行阳性检测。

来自各种生物样品的直接RT-QPCR，例如病毒，细菌，培养细胞，全血和粪便样本是可能的PrimeDirect Probe RT-qPCR Mix．利用这一技术开发了许多SARS-CoV-2检测方案指南。Lubke等等。描述了他们简单SARS-CoV的-2检测协议在《临床病毒学杂志》论文中使用PrimeDirect探针RT-qPCR混合检测呼吸道样本。

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参考

• CDI增强型新冠病毒-19检测EUA摘要，哈肯萨克大学医学中心（HUMC）分子病理学实验室（2020年4月15日）。可从以下网址获得：https://www.fda.gov/media/137036/download
• COV-19 IDx检测EUA摘要，Ipsum Diagnostics, LLC(2020年4月1日)。可以在:https://www.fda.gov/media/136621/download
• 棕色，J.R.等等。SARS-COV2 N基因实时RT-PCR靶和市售的MasterMix的比较。生物十四2020.04.17.047118;DOI：https://doi.org/10.1101/2020.04.17.047118
• Lubke, N。等等。自由提取-SARS-CoV的-2检测通过快速RT-qPCR的通用于所有原发性呼吸材料。中国。性研究。130年,104579 (2020). 网址：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7405857/
• 雷恩斯，M.M。等等。一种灵敏和负担得起的多重RT-qPCR测定对SARS-CoV的-2的检测。medRxiv2020.07.14.20154005;DOI：https://doi.org/10.1101/2020.07.14.20154005
• 朱，N。等等。一种新型冠状病毒来自2019年中国肺炎患者。N.英格兰。J.医学。NEJMoa2001017（2020）；内政部：https://www.nejm.org/doi/full/10.1056/nejmoa2001017
  
  • 朱等等。补充附录:RT-qPCR方案及使用的引物