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识别和克隆疫苗目标

基于下一代的TCR和BCR曲线分析允许系统范围内的特异性受体构造的解密及其对感染中适应性免疫的贡献。一旦获得病毒基因组序列和宿主BCR和TCR免疫分布数据,就可以使用生物信息学进行进一步的分析以显示可用于有效选择疫苗候选物的病毒抗原和疫苗靶标(病毒表面受体)。精致的生物信息学管道提出了由于这种试验而导致的大型数据集的复杂性,以发现TCR和靶特异性BCR抗体序列的反应簇。通过将病症的病人(健康供体)(Schultheiß等,2020)进行比较,可以通过比较病人的免疫曲目来推导出特异性的TCR和BCR(或中和抗体序列)。

bet188手机端豆类生物的Cogent NGS免疫分析器软件可与SMARTer Human BCR IgG IgM H/K/L Profiling Kit一起使用,分析克隆型数和V(D)J序列信息。该软件用于分析由Illumina测序仪生成的FASTQ文件中存储的序列数据,这些文件来自使用SMARTer Human BCR IgG IgM H/K/L Profiling Kit或SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit v2准备的库。

有说服力的分析

好处

  • 快速结果后测序-一个软件涵盖v(d)j转录物和t和b细胞的转录物和clonotypes分析
  • 对您的数据的信心更多-准确可靠的克隆型调用和定量,无PCR重复和错误
  • 灵活的排序选项-在所有Illumina平台的MiSeq®或CDR3分析上获得完整的V(D)J分析

图1所示。克隆型数量上的生物变异为检测健康或患病样本之间的细微差异提供了信心。从不同供体中获得的PBMC RNA的密克型计数。使用令人智能人BCR IgG IgM H / K / L分析试剂盒测定IgG,IgM,IgK和IgL Clonotype从10ng中的每组PBMC RNA(由不同颜色表示)。图书馆被标准化为100,000读数进行分析。使用Cogent NGS免疫分析器分析数据,然后使用R绘制。


使用基因组学和免疫分析数据的生物信息分析鉴定的疫苗靶标被克隆到适当的载体中进行进一步研究。使用传统的连接基克隆方法产生靶疫苗构建体可以耗时,费力,昂贵。我们的融合克隆技术可以帮助研究人员通过加快靶疫苗结构的产生来加速疫苗开发工作流程。融合克隆是快速的,高精度(> 95%),依赖性独立于(任何PCR或合成插入物),可以克隆到任何轨迹处的任何载体中),无缝,定向和高吞吐量。融合酶有效且精确地融合PCR产生的插入序列和线性化的矢量,利用其端部15bp重叠。使用15-BP重叠消除了对限制性现场可用性的依赖性,这是一种基于传统连接的克隆的显着缺点。一种简单的15分钟内融合反应,可实现无缝和精确的工程构建体,其中不加入额外的载体或限制性位点衍生的DNA。融合克隆的速度和精度是生成目标疫苗表达构建体的关键优势,因为它允许研究人员避免将额外的碱/氨基酸添加到其靶疫苗中,这可能导致功能改变。

观看概述融合克隆技术应用的视频。

好处

  • Subcloning是不必要的,克隆任何插入物,进入任何迹象,只需一个反应
  • 高效 -超过95%的效率,具有广泛的片段尺寸,从0.5 kb到15 kb
  • 无缝建设 -最终结构没有剩余的碱基对(通常是限制摘要或TA克隆的情况)
  • 灵活地克隆单个或多个碎片 -同时克隆单或多个DNA片段,在单一反应中
  • 可用于执行站点定向诱变 -点击这里了解如何


有许多公布的工作实例,研究和开发针对各种病原体,包括冠状病毒,其中在其工作流程中使用辅成克隆技术的疫苗。

标题 关联 产品
克隆
SARS-CoV-2
SARS-CoV-2和其他B -冠状病毒细胞进入和受体使用的功能评估 融合卡扣组件
SARS-COV-2和SARS-COV感染之间的交叉反应抗体反应
来自人细胞冠状病毒基因组的RNA序列的稳定性
开发CRISPR作为对抗SARS-COV-2和流感的抗病毒策略 融合卡扣组件和恒星化学竞技细胞
其他病毒
在对Mers-cov和狂犬病病毒和小鼠中的重组复制缺乏狂犬病病毒的二价疫苗的开发及其在小鼠中的体液免疫原性 融合卡扣组件
中东呼吸综合征冠状病毒nsp1通过与病毒RNA的特定相互作用参与有效的传播
猪deltacoronavirus的基因操纵表明见解NS6和NS7功能:对疫苗设计的新策略
由非致病H5N1病毒制备的灭活流感疫苗的效力免受鸡抗原漂移的高致病性禽流感病毒的攻击
具有高病毒滴度和表达适用于疫苗发育的高抗原蛋白的新型猿猴腺病毒载体的快速策略
克隆ACE2同种型
冠状病毒受体,血管紧张素转化酶2(ACE2)的异质性质在分化气道上皮 融合智慧定向cDNA图书馆建筑套件

参考

Schultheiß,C.,等.来自Covid-19患者的T和B细胞受体曲目的下一代测序显示与疾病严重程度相关的签名。免疫53岁,442-455(2020)。


特色产品

猫。# 产品 尺寸 许可证 数量 细节
634933 In-Fusion®Smarter®定向cDNA图书馆建设套件 10 rxns. *

融合智能定向cDNA文库构建套件为生产高质量,全长cDNA文库提供敏感和有效的方法。该套件利用我们最具创新性技术的两个:智能(S.有魅力的m机狱一种t5 '末端RNAT.RANScript)技术与PCR扩增偶联的技术使得可以从多个聚a的纳米图产生高产的全长双链cDNA+或总RNA。IN-FUSION克隆技术可以很容易地克隆您更胜一筹的cDNA文库到任何载体内的任何位置。您可以使用在pSMART2IFD线性化的载体包括套件,或您选择的任何载体,用于克隆库中。从成品文库中分离的克隆可以直接转移到用于功能分析-而不需要兼容限制性位点线性化的任何表达载体。

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我们的产品将用于研究只使用.它们不得用于任何其他目的,包括但不限于人类使用、治疗或诊断用途,或任何类型的商业用途。未经我们事先书面批准,不得将我们的产品转让给第三方、转售、修改用于转售,或用于制造商业产品或向第三方提供服务。

文档 成分 图像数据

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智能(ER)cDNA合成与常规cDNA合成相比

智能(ER)cDNA合成与常规cDNA合成相比
SMART(ER)cDNA合成相对于传统的cDNA合成。与传统的cDNA合成方法涉及多酶/多步骤程序不同,SMART(er) cDNA合成协议由一个反转录反应在单个管中进行,没有适配器连接或中间纯化步骤。PCR扩增后,SMART(er) cDNA可立即用于各种下游应用。

回来

的IN-FUSION更胜一筹的定向cDNA文库构建试剂盒包括用于cDNA合成,文库构建和文库扩增组分

的IN-FUSION更胜一筹的定向cDNA文库构建试剂盒包括用于cDNA合成,文库构建和文库扩增组分
的IN-FUSION更胜一筹的定向cDNA文库构建试剂盒包括用于cDNA合成,文库构建和文库扩增组分。

回来

PCR筛选插入尺寸

PCR筛选插入尺寸

通过PCR插入大小筛选。从10ng对照小鼠肝总RNA产生辅成较令人置摸的定向cDNA文库。使用融合克隆试剂盒合成,尺寸分馏,尺寸分级,然后使用融合克隆试剂盒克隆到PSMART2IFD中的更智能的DS cDNA。15根据用户手册中的协议,PCR随机选择来自未取消化文库的菌落。在1.2%琼脂糖/ EtBR凝胶上电泳,电泳3μL样品PCR产物。Lane M:1-KB DNA梯子。

638948 在-Fusion®技术卡扣组件预混 50个Rxns *

融合卡扣组件主混合物设计用于快速,定向克隆一个或多个DNA片段中的DNA进入任何载体。通过识别在其端部15-BP重叠的情况下,该专有母母母母母母母母母母母母母母母母组混合熔化DNA片段(例如,PCR-产生的序列和线性化载体。该15-BP重叠可以设计成用于PCR扩增所需序列的引物。在融合时,Snap组件主混合物提供高效率,即使对于可能具有挑战性的应用,包括长片段,短寡核苷酸和多个片段的克隆。

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使用反向PCR融合捕捉组件与NeBuilder HIFI之间的性能比较。

使用反向PCR融合捕捉组件与NeBuilder HIFI之间的性能比较。

使用反向PCR融合捕捉组件与NeBuilder HIFI之间的性能比较。一个单一的3.8-kb的插入物(小组A.)或34.2 kB腺病毒插入(面板B.)克隆到2.7 kb的载体中,通过反PCR将其线性化。这些克隆反应在三个重复的in - fusion Snap Assembly和NEBuilder HiFi中进行。底漆是根据厂家的说明书设计的。转化和镀后,每个重复20个菌落进行Sanger测序(3.8 kb插入)或菌落PCR(腺病毒插入)分析,以确定克隆的准确性。In-Fusion Snap Assembly产生的菌落比NEBuilder HiFi多2倍。

回来

638948:融合卡扣组件主混合

638948:融合卡扣组件主混合

回来

融合克隆协议

融合克隆协议

融合克隆协议。

636767 Stellar™能力细胞(96孔板) 96 x 20 ul *

恒星富集电池布置在96孔板中,用于高通量转化。恒星细胞是一个大肠杆菌HST08应变,提供高转化效率。这些细胞可在多种应用中使用:从制备的cDNA和基因组文库的,到施工长度较长的基因组文库的,以亚克隆,甚至甲基化的DNA的克隆。恒星感受态细胞缺乏用于切割外国甲基化DNA的基因簇(MRR-hsdRMS-的McrBC和麦格拉),并因此用于克隆甲基化的DNA是有用的。该细胞也可用于蓝/白筛选(即,α-互补)与含有载体转化时lacZα基因。包括PUC19矢量,SOC介质,8帽条和板盖。建议使用这些态度的细胞与Takara Bio的融合PCR克隆套件一起使用。bet188手机端

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636767:恒星感受态细胞(96孔板)

636767:恒星感受态细胞(96孔板)


融合克隆:一般信息

查找有关融合技术,产品指南和性能与竞争的信息。

底漆设计和其他工具

使用我们的逐步设计工具设计您的融合底漆,或者访问摩尔比计算器并构建模拟器。

融合克隆提示和常见问题解答

了解有关In - Fusion克隆的更多信息,包括应用、提示、引物设计、载体和插入要求。

应用和技术笔记

查看关于融合技术如何为所有克隆需求执行的应用程序数据。

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传统的分子克隆

选择从各种高质量的试剂和试剂盒为您的分子克隆工作流程的每一步。

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bet188手机端188足彩网站Takara Bio USA,Inc。提供帮助研究人员探索关于基因发现,监管和功能问题的套件,试剂,仪器和服务。作为Takara Bio Group的bet188手机端188bet体育成188金宝搏登录网址员,TBUSA是拥有全球市场领导地位的公司的一部分,致力于通过生物技术改善人类状况。我们的使命是开发高质量的创新工具和服务,以加速发现。

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Capturem Trypsin提供蛋白质样本的快速,高效和完全消化,允许不间断的质量斑点工作流程在室温下进行下游蛋白质分析。该产品利用我们的新型Capturem技术以旋转柱状格式,具有膜 - 固定的胰蛋白酶。Capturem胰蛋白酶柱可以用来完全在少于一分钟内完全消化蛋白质样品(蛋白质覆盖率)比使用溶液胰蛋白酶消化所获得的消化效率(蛋白质覆盖率)。

Capturem胰蛋白酶技术

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