识别和克隆疫苗目标

基于下一代的TCR和BCR曲线分析允许系统范围内的特异性受体构造的解密及其对感染中适应性免疫的贡献。一旦获得病毒基因组序列和宿主BCR和TCR免疫分布数据，就可以使用生物信息学进行进一步的分析以显示可用于有效选择疫苗候选物的病毒抗原和疫苗靶标（病毒表面受体）。精致的生物信息学管道提出了由于这种试验而导致的大型数据集的复杂性，以发现TCR和靶特异性BCR抗体序列的反应簇。通过将病症的病人（健康供体）（Schultheiß等，2020）进行比较，可以通过比较病人的免疫曲目来推导出特异性的TCR和BCR（或中和抗体序列）。

bet188手机端豆类生物的Cogent NGS免疫分析器软件可与SMARTer Human BCR IgG IgM H/K/L Profiling Kit一起使用，分析克隆型数和V(D)J序列信息。该软件用于分析由Illumina测序仪生成的FASTQ文件中存储的序列数据，这些文件来自使用SMARTer Human BCR IgG IgM H/K/L Profiling Kit或SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit v2准备的库。

图1所示。克隆型数量上的生物变异为检测健康或患病样本之间的细微差异提供了信心。从不同供体中获得的PBMC RNA的密克型计数。使用令人智能人BCR IgG IgM H / K / L分析试剂盒测定IgG，IgM，IgK和IgL Clonotype从10ng中的每组PBMC RNA（由不同颜色表示）。图书馆被标准化为100,000读数进行分析。使用Cogent NGS免疫分析器分析数据，然后使用R绘制。

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使用基因组学和免疫分析数据的生物信息分析鉴定的疫苗靶标被克隆到适当的载体中进行进一步研究。使用传统的连接基克隆方法产生靶疫苗构建体可以耗时，费力，昂贵。我们的融合克隆技术可以帮助研究人员通过加快靶疫苗结构的产生来加速疫苗开发工作流程。融合克隆是快速的，高精度（> 95％），依赖性独立于（任何PCR或合成插入物），可以克隆到任何轨迹处的任何载体中），无缝，定向和高吞吐量。融合酶有效且精确地融合PCR产生的插入序列和线性化的矢量，利用其端部15bp重叠。使用15-BP重叠消除了对限制性现场可用性的依赖性，这是一种基于传统连接的克隆的显着缺点。一种简单的15分钟内融合反应，可实现无缝和精确的工程构建体，其中不加入额外的载体或限制性位点衍生的DNA。融合克隆的速度和精度是生成目标疫苗表达构建体的关键优势，因为它允许研究人员避免将额外的碱/氨基酸添加到其靶疫苗中，这可能导致功能改变。

观看概述融合克隆技术应用的视频。

好处

• Subcloning是不必要的,克隆任何插入物，进入任何迹象，只需一个反应
• 高效 -超过95％的效率，具有广泛的片段尺寸，从0.5 kb到15 kb
• 无缝建设 -最终结构没有剩余的碱基对(通常是限制摘要或TA克隆的情况)
• 灵活地克隆单个或多个碎片 -同时克隆单或多个DNA片段，在单一反应中
• 可用于执行站点定向诱变 -点击这里了解如何

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有许多公布的工作实例，研究和开发针对各种病原体，包括冠状病毒，其中在其工作流程中使用辅成克隆技术的疫苗。

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参考

Schultheiß，C.，等．来自Covid-19患者的T和B细胞受体曲目的下一代测序显示与疾病严重程度相关的签名。免疫53岁,442-455（2020）。