胞外囊泡分离常问的问题gydF4y2Ba

捕获EV自旋柱包含膜，是与凝集素基底物功能化，结合细胞外囊泡。gydF4y2Ba

• 超离心法根据颗粒密度进行分离。因此，它分离出不同大小的混合囊泡群，以及非ev污染物，如白蛋白等蛋白质。由于高速，这一过程相当严酷，经常损害电动汽车。gydF4y2Ba
• Capturem胞外囊泡分离试剂盒专门分离直径小于200 nm的电动汽车。这一过程是温和的，电动汽车在电子显微镜等下游应用中保持完整。gydF4y2Ba

捕获EV色谱柱提供了高纯度的EV样品，没有污染的蛋白质。超离心法得到的样品中含有杂质，如白蛋白。因此，由于这些杂质，超离心法会得到更高的总蛋白浓度。gydF4y2Ba

我们的试剂盒使用含有有机盐的磷酸盐缓冲液洗脱电动汽车。洗脱颗粒可直接用于物理颗粒分析，如纳米颗粒跟踪分析(NTA)和细胞摄取测定标记。如果您的下游应用涉及蛋白质和/或RNA提取，将有必要先超声或淡化洗脱样品。gydF4y2Ba

是的，你可以用甘露糖或葡萄糖缓冲液进行竞争洗脱。然而，这将降低您的EV产量，您将需要确定这些缓冲区是否与下游应用程序兼容。gydF4y2Ba

对我们在20°C条件下，在水超声仪（超声波清洁器，JSP）中对样品进行5分钟的超声处理。如果您使用的是不同的超声波仪，则可能需要进行优化。gydF4y2Ba

我们建议采取以下步骤:gydF4y2Ba

1. 在Amicon Ultra-0.5离心过滤装置（3-kDa或10-kDa MWCO，由用户提供）上装载使用mini套件获得的整个样品（或使用maxi套件获得的500µl样品）。如果样品体积小于500µl，则向过滤装置加水，使体积达到500µl。在14000时离心gydF4y2BaggydF4y2Ba静置5-30分钟，弃掉流道。gydF4y2Ba
2. 向过滤单元加水，使体积达到500µl，并在14000离心gydF4y2BaggydF4y2Ba持续5-30分钟。gydF4y2Ba
3. 将保留液(过滤器中的样品)转移到一个新的2ml收集管(由用户提供)。gydF4y2Ba
4. 对于用maxi试剂盒获得的样品，用剩余的500µl样品重复步骤1-3。gydF4y2Ba

此数字可能因输入样本类型、体积和条件而异。根据我们的经验，对于从1ml血浆中回收的EV，从EV货物中产生约1ng RNA和5µg蛋白质。gydF4y2Ba

从1毫升血浆中，Capturem EV最大色谱柱给出的EV产量是迷你色谱柱的10倍。在其最大容量下，captureem EV maxi列给出的EV产量(总EV数)为~10gydF4y2Ba^11gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

预先清除柱去除任何大的膜碎片、凋亡小体、更小的细胞碎片等，否则会堵塞Capturem柱，阻止EV分离。gydF4y2Ba

过滤单元去除非特异性蛋白聚集物、脂蛋白、细胞因子等，通过荧光纳米颗粒跟踪分析获得更高纯度的ev。gydF4y2Ba

购买Amicon Ultra-0.5离心过滤机组(赛默飞世尔Scientific, Cat。# UFC510024)，其中有一个100 kda的MWCO。请确保使用我们协议中描述的过滤器。gydF4y2Ba

您可以使用蛋白酶K，但它可能会导致暴露在EVs表面的蛋白质部分降解，从而影响您在下游分析中检测这些蛋白质的能力。gydF4y2Ba

是的，你可以使用一个摆动桶转子或一个固定角度转子。gydF4y2Ba