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胞外囊泡分离常问的问题GydF4y2Ba

这GydF4y2BaCapturem细胞外囊泡隔离套件GydF4y2Ba为简单、快速分离细胞外囊泡(ev;例如,外泌体),来自各种生物液体,如血浆、血清、尿液、牛奶、唾液、细胞条件培养基和脑脊液。我们提供两种尺寸的套件-迷你和最大格式-所以你可以从一系列的样品量净化电动汽车。GydF4y2Ba

如有以下未解答的问题,请参阅用户手册和其他可通过产品表查阅的文档GydF4y2Ba这个页面GydF4y2Ba。请GydF4y2Ba联系我们GydF4y2Ba如果你找不到问题的答案。GydF4y2Ba

Capturem EV列中使用什么结合化合物?GydF4y2Ba

捕获EV自旋柱包含膜,是与凝集素基底物功能化,结合细胞外囊泡。GydF4y2Ba

Capturem EV方法如何使用超速离心的EV隔离不同?GydF4y2Ba

  • 超速离心根据密度分离颗粒。因此,它将其分离出不同尺寸的混合囊泡,以及非EV污染物,例如白蛋白等蛋白质。由于高速,这个过程非常苛刻,往往会损害EVS。GydF4y2Ba
  • Capturem细胞外囊泡隔离试剂盒具体地分离小于200nm的EVS直径。该过程温和,EVS保持完整的下游应用,例如电子显微镜。GydF4y2Ba

为什么Capturem细胞外囊泡分离试剂盒的总蛋白浓度低于超离心法?GydF4y2Ba

捕获EV色谱柱提供了高纯度的EV样品,没有污染的蛋白质。超离心法得到的样品中含有杂质,如白蛋白。因此,由于这些杂质,超离心法会得到更高的总蛋白浓度。GydF4y2Ba

我可以直接使用纯化的样品进行下游应用程序吗?GydF4y2Ba

我们的试剂盒使用含有有机盐的磷酸盐缓冲液洗脱电动汽车。洗脱颗粒可直接用于物理颗粒分析,如纳米颗粒跟踪分析(NTA)和细胞摄取测定标记。如果您的下游应用涉及蛋白质和/或RNA提取,将有必要先超声或淡化洗脱样品。GydF4y2Ba

我可以用不同的洗脱液吗?GydF4y2Ba

是的,你可以用甘露糖或葡萄糖缓冲液进行竞争洗脱。然而,这将降低您的EV产量,您将需要确定这些缓冲区是否与下游应用程序兼容。GydF4y2Ba

不同洗脱缓冲液的胞外囊泡产量。GydF4y2Ba用Capturem细胞外囊泡分离柱(迷你)从相同量的血浆(200µl)中分离出细胞外囊泡。用100µl 1) 200 mM甲基α- d -甘露吡喃苷在150 mM NaCl中,2)1 M葡萄糖在150 mM NaCl中,或3)capture EV洗脱缓冲液洗脱。GydF4y2Ba小组A.GydF4y2BaNTA用于评估用不同洗脱条件获得的EV的浓度和尺寸分布。GydF4y2Ba面板B.GydF4y2Ba使用试剂盒提供的洗脱缓冲液,从200µl血浆中获得的总产量(总ev数)最高。GydF4y2Ba

我可以超聊纯净的EVS for Western Blot分析吗?GydF4y2Ba

是的。我们将样品在水超声器(超声波清洗机,JSP)中20°C超声5分钟。如果您正在使用不同的声波发生器,则可能需要进行优化。GydF4y2Ba

如何浏览纯化的EV样本?GydF4y2Ba

我们建议以下步骤:GydF4y2Ba

  1. 在Amicon Ultra-0.5离心过滤器单元(3-kDa或10-kDa MWCO,由用户提供)上装载与迷你工具包获得的整个样品(或与maxi工具包获得的500µl样品)。如果样品体积小于500µl,向过滤单元加水使体积达到500µl。离心机在14000GydF4y2BaGGydF4y2Ba静置5-30分钟,弃掉流道。GydF4y2Ba
  2. 向过滤单元加水,使体积达到500µl,并在14000离心GydF4y2BaGGydF4y2Ba5-30分钟。GydF4y2Ba
  3. 将保留液(过滤器中的样品)转移到一个新的2ml收集管(由用户提供)。GydF4y2Ba
  4. 对于用maxi试剂盒获得的样品,用剩余的500µl样品重复步骤1-3。GydF4y2Ba

我能从EV样本中纯化出多少蛋白质和RNA ?GydF4y2Ba

这个数字可以根据输入样本类型、体积和条件而变化。根据我们的经验,从1ml血浆中回收的EV可从EV货物中提取约1ng的RNA和5µg的蛋白质。GydF4y2Ba

Maxi Column的EV产量如何与Mini列的产量进行比较?GydF4y2Ba

从1毫升等离子体,Capturem EV Maxi柱给出了EV产量,即比迷你柱大的10倍。Capturem EV Maxi列以其最大容量,给出了〜10的EV产量(EV总数)GydF4y2Ba11GydF4y2Ba。GydF4y2Ba

细胞外囊泡产量比较GydF4y2Ba

预清除栏目的目的是什么?GydF4y2Ba

预清除柱去除任何大膜片段,凋亡体,较小的细胞片段等,否则将堵塞Capturem柱并防止EV隔离。GydF4y2Ba

Amicon过滤器的用途是什么?为什么需要它?GydF4y2Ba

过滤单元去除非特异性蛋白聚集物、脂蛋白、细胞因子等,通过荧光纳米颗粒跟踪分析获得更高纯度的ev。GydF4y2Ba

细胞外囊泡产量和无过滤GydF4y2Ba

在使用mini套件时,采集样本上清需要单独购买哪一个Amicon过滤器?GydF4y2Ba

购买AMICON Ultra-0.5离心式过滤装置(Thermo Fisher Scientific,Cat。#UFC510024),拥有100 kda MWCO。请务必按照我们的协议中所述使用过滤器。GydF4y2Ba

我可以用蛋白酶k治疗Capturem-Pharsool eV,以除去来自样品的大部分蛋白质,而不是使用Amicon过滤器吗?GydF4y2Ba

你可以使用蛋白酶K,但它可能会导致暴露在电动汽车表面的蛋白质的部分降解,因此影响你在下游分析中检测这些蛋白质的能力。GydF4y2Ba

对于最大的圆柱,我可以使用摆动斗或定角转子吗?GydF4y2Ba

是的,你可以使用一个摆动桶转子或一个固定角度转子。GydF4y2Ba


快速、纯、浓缩的从生物液中纯化细胞外囊泡GydF4y2Ba

查看如何始终如一地获得足够产量的纯、浓缩电动汽车,用于后续的蛋白质组学、基因组学和转录组学分析的数据。GydF4y2Ba

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